一种蚓激酶制备工艺（蚯蚓专利）

申请专利号 CN99112806.0 　
专利申请日 1999.04.01 　
名称 一种蚓激酶制备工艺　 　
公开（公告）号 CN1229852
公开（公告）日 1999.09.29 　
类别 化学；冶金
颁证日 　
优先权  
申请（专利权） 长春高斯达生化药业集团股份有限公司 　
地址 130041吉林省长春市柳条路2号　
发明（设计）人 孙启良; 冯来坤 　
国际申请  
国际公布  
进入国家日期 　
专利代理机构 吉林省专利服务中心 　
代理人 陈宏伟 　
摘要
本发明公开了一种蚓激酶制备工艺，将蚯蚓经生理盐水处理，采用匀浆、冻融法制备蚯蚓粗提物，然后通过超滤、亲和层析、离子交换及分子筛等技术组合，从蚯蚓中提取纯化三种有纤溶活性的蚓激酶，其分子量分别为３．０±０．２万、２．５±０．２万及２．２±０．２万的三种蛋白质，其纯度分别达到ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）显示一条带，高效液相色谱（ＨＰＬＣ）呈现一个峰的水平，其纤溶活性均为每mg含相当于尿激酶活性１０００单位以上。体外溶血栓试验证明有良好的直接溶栓作用；动物体内试验证明，其体内溶血栓活性优于尿激酶。 　
主权项
1、一种蚓激酶制备工艺，包括以下工艺制备：将蚯蚓用清水洗净泥土，加入生理盐水冲洗处理，按（V／V） 1：3～5的比例加入 0．2MpH4．6 ～ 4.8的柠檬酸钠制成匀浆，经1000～4000rpm离心20～40 分钟，取上清液，通过超滤法去除大分子蛋白，滤液用亲和层析法初步纯化，，收集活性组分，再通过离子交换柱进一步纯化，取其活性组分，再经分子筛层析，分段收集各个活性组分，取分子量为3．0 ± 0．2万、2．5±0．2万及2．2＋0．2万的三种活性蛋白质。